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介紹一些腫瘤單細胞制備的其他方法

更新時間:2025-06-13      點擊次數:352
腫瘤單細胞制備方法除了使用美天旎 Tumor Dissociation Kit 這種基于酶解的方法外,還有以下幾種常見的方法:


  • 機械解離法

    • 操作方式:通過物理手段,如使用剪刀、鑷子等器械將腫瘤組織剪碎,再利用研磨、勻漿等方式進一步破碎組織,使細胞分散。或者使用組織研磨器、勻漿器等儀器,對腫瘤組織進行機械研磨和勻漿處理,從而獲得單細胞懸液。

    • 優缺點:優點是操作簡單、成本低,不需要特殊的試劑。缺點是容易造成細胞損傷,細胞活性和得率較低,而且對于質地較硬的腫瘤組織,解離效果可能不佳。

  • 化學解離法

    • 操作方式:利用化學試劑破壞細胞間的連接,使腫瘤組織分散成單細胞。常用的試劑如胰蛋白酶、乙二胺四乙酸(EDTA)等。胰蛋白酶能夠水解細胞間的蛋白質連接,EDTA 則可以螯合細胞外的鈣離子,破壞細胞間的鈣依賴連接。通常是將腫瘤組織切成小塊,放入含有胰蛋白酶或 EDTA 的消化液中,在適宜的溫度和時間條件下進行消化,使細胞解離。

    • 優缺點:優點是解離效率較高,能夠快速獲得大量單細胞。缺點是化學試劑可能對細胞表面抗原和細胞功能產生影響,而且消化時間和試劑濃度需要嚴格控制,否則容易導致細胞過度消化而死亡。

  • 流式細胞儀分選法

    • 操作方式:先將腫瘤組織制備成單細胞懸液,然后標記細胞表面的特異性抗原,使用流式細胞儀根據細胞的大小、粒度以及表面抗原的表達情況,對單細胞進行分選。通過流式細胞儀的激光檢測和細胞分類裝置,將不同特征的細胞分離開來,收集到特定的細胞群體,從而獲得純凈的單細胞懸液。

    • 優缺點:優點是能夠精確地分離出特定類型的腫瘤細胞,純度高,可同時對多個參數進行分析和分選。缺點是儀器設備昂貴,操作復雜,需要專業人員進行操作,而且對于細胞懸液的質量要求較高,細胞濃度和活性會影響分選效果。

  • 微流控技術

    • 操作方式:利用微流控芯片,將腫瘤組織單細胞懸液引入芯片的微通道中。通過微通道內的物理結構和流體力學原理,實現單細胞的捕獲、分離和培養。例如,利用微柱陣列、液滴微流控等技術,將單個細胞包裹在微小的液滴或微腔室中,實現單細胞的分離和培養。

    • 優缺點:優點是能夠在微觀尺度上精確操控細胞,實現高通量的單細胞分析,所需樣本量少,對細胞的損傷小。缺點是芯片的制備和操作較為復雜,技術難度高,成本也相對較高,而且通量有限,難以處理大量的腫瘤組織樣本。




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