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Western及IP裂解液在不同樣本類型中的應用效果有何差異?

更新時間:2025-08-13      點擊次數:292
Western 及 IP 裂解液在不同樣本類型中的應用效果受樣本結構、成分等因素影響,存在明顯差異。下面從細胞樣本和組織樣本兩大類別,細分不同樣本類型進行分析:


  • 細胞樣本

    • 哺乳動物細胞系:對于常見的貼壁或懸浮哺乳動物細胞系(如 HeLa、HEK293T),常規的 Western 裂解液(含 SDS、Tris - HCl、NaCl 等)可高效裂解細胞。SDS 能迅速破壞細胞膜,使蛋白質變性,釋放細胞內總蛋白,適用于 Western Blot 檢測蛋白表達水平;溫和型 IP 裂解液(含 Triton X - 100 等)則可保留蛋白質天然構象,滿足免疫沉淀研究蛋白質相互作用的需求。例如在研究腫瘤細胞信號通路蛋白時,Western 裂解液提取的蛋白可清晰顯示蛋白表達量變化,IP 裂解液則能有效富集相互作用蛋白復合物 。

    • 原代細胞:原代細胞結構和功能更接近體內狀態,但相對脆弱。使用裂解液時需避免過度處理,宜采用溫和裂解條件和低濃度表面活性劑的裂解液,以減少對細胞內蛋白質結構和功能的破壞。如在神經原代細胞研究中,強裂解液可能導致離子通道蛋白等敏感蛋白失活,而溫和裂解液配合輕柔的振蕩或短時超聲,既能有效裂解細胞,又能維持蛋白質活性,保證后續實驗中蛋白功能分析的準確性 。

    • 細菌和酵母細胞:這類細胞具有細胞壁,普通裂解液難以滲透。處理細菌樣本時,常需添加溶菌酶先破壞細胞壁,再配合含有較強去垢劑(如 Sarkosyl)的裂解液裂解細胞膜;酵母細胞則可通過研磨珠破碎結合裂解液處理。相較于哺乳動物細胞,細菌和酵母細胞內蛋白質種類和豐度差異大,裂解后需注意去除核酸等雜質,避免干擾后續蛋白質分析。例如在研究酵母細胞周期蛋白時,需優化裂解液成分和處理方法,確保目標蛋白充分釋放且雜質干擾最小化 。

  • 組織樣本

    • 軟組織(如肝臟、脾臟):軟組織細胞間連接相對疏松,但細胞類型多樣,蛋白質組成復雜。使用添加蛋白酶 K 等消化酶的裂解液,可幫助分解細胞間質,促進細胞裂解和蛋白質釋放。在肝臟組織蛋白質組學研究中,此類裂解液能有效裂解肝細胞、庫普弗細胞等多種細胞,獲得全面的蛋白質提取物,但需注意控制消化酶用量和作用時間,防止蛋白質過度降解 。

    • 纖維成分較多的組織(如肌肉、皮膚):由于含有大量膠原蛋白等纖維成分,單純裂解液處理難以充分裂解細胞。需結合機械勻漿(如組織勻漿器)或超聲破碎等物理方法,先破碎組織,再利用裂解液釋放蛋白質。在肌肉組織研究中,物理破碎使肌纖維結構破壞后,裂解液才能有效滲透到細胞內。同時,此類組織中纖維蛋白含量高,提取蛋白質時需通過離心等方式去除沉淀,避免影響后續分析 。

    • 植物組織:植物細胞具有堅硬的細胞壁(主要成分是纖維素、果膠等),需使用含有纖維素酶、果膠酶等成分的裂解液,先破除細胞壁,再裂解細胞。此外,植物細胞內含有大量次生代謝產物(如酚類、多糖),這些物質會與蛋白質結合,影響蛋白質提取和后續實驗。因此,植物組織裂解液中常添加 PVP(聚乙烯吡咯烷酮)等吸附劑去除酚類物質,通過高鹽 - 低 pH 等緩沖體系分離多糖,以獲得高質量的植物蛋白質提取物 。



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